通過流式細胞術進行細胞周期檢測主要基于碘化丙啶（PI）染色評估DNA含量的原理。 PI的結合特性確保DNA含量的準確定量，并且允許我們了解G1、S和G2細胞周期階段或亞G1期凋亡細胞的分布。用PI進行DNA定量大多需要使用酒精或醛類固定，時間長，又費勁。此外，這些方法與熒光標記抗體可能會存在不兼容。
為此，Yuqing Shen等人在2017年8月份的Bio Protoc. 雜志上發表了《Rapid Profiling Cell Cycle by Flow Cytometry Using Concurrent Staining of DNA and Mitotic Markers》優化了以前建立的低滲緩沖液破膜方法，使得PI可以和磷酸組蛋白H3（pH3）同時標記，既能在20分鐘內完成染色，并且可以在傳統三個周期的基礎上，將G2期和M期區分開來。
材料
1、流式管
2、DPBS（Dulbecco’s phosphate buffered saline, no calcium, no magnesium ）
3、Alexa Fluor® 647 rat anti-phospho-Histone H3 (pS28) (BD, BD Bioscience, catalog number: 558217)
4、檸檬酸鈉(Sigma-Aldrich, catalog number: 1613859)
5、Triton™ X-100 (Sigma-Aldrich, catalog number: T8787)
6、Propidium iodide (PI) (C27H34I2N4) (Sigma-Aldrich, catalog number: P4170)
7、低滲裂解/ PI緩沖液，配方如下：
去離子水/蒸餾水、0.1％檸檬酸鈉（重量體積比）、0.1％Triton X-100（體積比）、50ug/ml PI
注意：該緩沖液在4°C可保存數月。PI可能致癌，配制時需注意防護。
儀器
1、離心機
2、流式細胞儀
步驟
注意：所有的步驟均在室溫下進行。
1、在流式管中，以1ml DPBS重懸0.4×10E6細胞。
2、200×g離心5分鐘。
3、去掉DPBS。
4、以100ul低滲裂解/ PI緩沖液重懸細胞，并加入0.5ul Alexa Fluor® 647 rat anti-phospho-Histone H3，輕輕混勻。
注：由于低滲緩沖液可以去除大多數RNA，所以不需要加入RNase。
5、室溫、避光孵育至少20分鐘（但不要超過2小時）。上機檢測，至少收集20000個有效信號。
注：上機前洗滌不會改變結果，反而容易造成細胞丟失。
數據分析
如下圖所示，排除掉碎片和粘連體之后，通過PI檢測DNA含量可將細胞周期分為G1、S、G2/M三個期（C圖），不過通過磷酸化組蛋白H3，進一步能將G2期和M期分開（D圖）。
參考文獻：
Bio Protoc. 2017 August 20; 7(16): . doi:10.21769/BioProtoc.2517.Aut
材料
1、流式管
2、DPBS（Dulbecco’s phosphate buffered saline, no calcium, no magnesium ）
3、Alexa Fluor® 647 rat anti-phospho-Histone H3 (pS28) (BD, BD Bioscience, catalog number: 558217)
4、檸檬酸鈉(Sigma-Aldrich, catalog number: 1613859)
5、Triton™ X-100 (Sigma-Aldrich, catalog number: T8787)
6、Propidium iodide (PI) (C27H34I2N4) (Sigma-Aldrich, catalog number: P4170)
7、低滲裂解/ PI緩沖液，配方如下：
去離子水/蒸餾水、0.1％檸檬酸鈉（重量體積比）、0.1％Triton X-100（體積比）、50ug/ml PI
注意：該緩沖液在4°C可保存數月。PI可能致癌，配制時需注意防護。
儀器
1、離心機
2、流式細胞儀
步驟
注意：所有的步驟均在室溫下進行。
1、在流式管中，以1ml DPBS重懸0.4×10E6細胞。
2、200×g離心5分鐘。
3、去掉DPBS。
4、以100ul低滲裂解/ PI緩沖液重懸細胞，并加入0.5ul Alexa Fluor® 647 rat anti-phospho-Histone H3，輕輕混勻。
注：由于低滲緩沖液可以去除大多數RNA，所以不需要加入RNase。
5、室溫、避光孵育至少20分鐘（但不要超過2小時）。上機檢測，至少收集20000個有效信號。
注：上機前洗滌不會改變結果，反而容易造成細胞丟失。
數據分析
如下圖所示，排除掉碎片和粘連體之后，通過PI檢測DNA含量可將細胞周期分為G1、S、G2/M三個期（C圖），不過通過磷酸化組蛋白H3，進一步能將G2期和M期分開（D圖）。
參考文獻：
Bio Protoc. 2017 August 20; 7(16): . doi:10.21769/BioProtoc.2517.Aut