確定外周血白細胞亞群的組成及其活化狀態，是臨床診斷和臨床研究中最常用的手段。 但是，目前的方案大多是每管5個抗體，所以需要很多管。
Jozsef Bocsi等人設計的OMIP-023方案，用了10色13個抗體（其中CD8、CD14、CD19使用同一熒光素，CD16、CD56使用同一熒光素），可區分中性粒細胞、嗜酸、嗜堿、單核細胞及其亞群、漿細胞及其亞群、T及其亞群、B、NK及其亞群、Treg、NKT，并可分析一些細胞活化標記（HLA-DR、CD38、CD25、CD127、CD69等）。
用10色13抗體方案，可以使用少量樣本檢測出大量的細胞群體，既節省設門抗體，又可獲得更多信息，性價比極高。
我們來看一下該方案的組成：
方案的分析步驟，為了讓大家更清楚分析，我們將圖片分解解讀。
圖1、FSC Peak/FSC TOF排除粘連體
圖2、通過CD45/SSC，圈出4堆細胞：L＝淋巴細胞、M＝單核細胞、B＝嗜堿粒細胞、N+E＝中性粒＋嗜酸，不過這三堆都不純粹，需要通過后續設門排除掉雜質細胞或干擾信號，才能獲得純粹的群體。這里我插一句，作者的這個圖確實不漂亮，可能跟他們這個樣本是臍血有關吧。
圖3～6，是N+E門進一步設門圈出純粹中性粒細胞群體的步驟，圖3是排除掉CD4＋信號，只取CD4－的信號，接著進一步利用圖4的CD16＋＋圈中中性粒細胞，最后利用圖6排除掉CD8＋信號，得到最終純粹的中性粒細胞群體。 嗜酸粒細胞的分析比較干脆，通過圖3排除掉CD4＋信號后，圖4里面CD16－的信號就是嗜酸粒細胞了，圖5分析的嗜酸粒細胞的CD69表達情況，即反映的是嗜酸粒細胞的活化狀態。
圖7～8是對圖6獲得的純粹中性粒細胞群體分析其活化情況，圖7反映的是中性粒細胞CD127（IL7Rα）活化情況，圖8則用CD69和CD127雙參數來反映中性粒細胞活化狀態。
圖9～12，分析的是嗜堿粒細胞的分析過程，與前面圖2中的B門（嗜堿粒細胞）不同，這個設門得到的嗜堿粒細胞更純，首先圖9排除掉CD4＋細胞，并選擇SSC小的群體，接著圖10中排除掉CD8＋T、CD14＋單核、CD19＋B和CD3＋T，然后圖11選擇CD38高表達CD25＋的群體，最后在圖12的CD45/SSC散點圖中確認嗜堿粒細胞位置正確。
圖13～15，在圖2的M門基礎上，進一步設門確定純粹單核細胞群體及其活化和分群情況。圖13排除掉CD8＋群體，圖14排除掉CD4高表達的群體，最后圖15可將單核細胞分為三個亞群：A－經典型單核、B－非經典單核、C－中間型單核。
圖16～19，在圖2的L門基礎上，進一步分析淋巴細胞及其亞群，圖16圈中CD3＋細胞，圖17分出CD56＋的NKT和CD56－的T細胞，圖17對T細胞分析CD4、CD8的表達，分為：A－CD8單陽性T、B－CD4＋CD8＋雙陽性T、C－CD4－CD8－雙陰性T、D－CD4單陽性T。圖19在CD4單陽性T細胞上分析CD25＋CD127－/low的Treg細胞比例。
圖20～23是在圖16中CD3－細胞群的基礎上，分析非T細胞亞群，圖20將CD3－細胞進一步排除掉CD4＋信號。圖21選出CD16/CD56＋的NK細胞和CD16/CD56－而HLA-DR高表達的B細胞＋漿細胞。圖22是對圖21NK細胞的分群，NK分為CD8＋NK和CD8－NK兩群。圖23則是對圖21中B＋漿的群體進一步細分為CD38高表達的漿細胞和CD38variant的B細胞。
怎么樣？這個10色13抗體方案高效吧？雖然外周血免疫細胞還有很多，目前免疫治療中需要的PD1、PDL1等都沒包括進去，但對于普通的監測，這個方案的信息挺豐富了。
參考文獻：
Bocsi József,Melzer Susanne,Dähnert Ingo et al. OMIP-023: 10-color, 13 antibody panel for in-depth phenotyping of human peripheral blood leukocytes.[J] .Cytometry A, 2014, 85(9): 781-4.
怎么樣？這個10色13抗體方案高效吧？雖然外周血免疫細胞還有很多，目前免疫治療中需要的PD1、PDL1等都沒包括進去，但對于普通的監測，這個方案的信息挺豐富了。
參考文獻：
Bocsi József,Melzer Susanne,Dähnert Ingo et al. OMIP-023: 10-color, 13 antibody panel for in-depth phenotyping of human peripheral blood leukocytes.[J] .Cytometry A, 2014, 85(9): 781-4.